提取染色體DNA和質(zhì)粒DNA的方法

時間：2020-01-05作者：杭州廣旭地坪工程有限公司瀏覽：815

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• 詞條

  詞條說明

• 質(zhì)粒DNA構(gòu)建的酶切目的、原理、器材、試劑、實驗準備

  II型限制性內(nèi)切酶能識別雙鏈質(zhì)粒構(gòu)建DNA內(nèi)部的特殊序列并在識別位點處將雙鏈切斷，形成粘性末端或齊平末端，通過電泳酶切后的DNA混合物能夠確認和分離酶切片段。 1．目的 學(xué)會用限制性內(nèi)切酶切割質(zhì)粒DNA。 2．原理 II型限制性內(nèi)切酶能識別雙鏈DNA內(nèi)部的特殊序列并在識別位點處將雙鏈切斷，形成粘性末端或齊平末端，通過電泳酶切后的DNA混合物能夠確認和分離酶切片段。 3．器材 旋渦混合器，微量移液

• 提取染色體DNA和質(zhì)粒DNA的方法

  一、質(zhì)粒構(gòu)建原理 在堿性條件下，染色體DNA和質(zhì)粒DNA都發(fā)生變性，但質(zhì)粒DNA的**螺旋共價閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的兩條互補鏈不會*分離，當用酸性的高鹽緩沖液將pH中和至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)到原來的構(gòu)型并溶解在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。通過離心，纏結(jié)的染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。上清液中的質(zhì)粒DNA因不溶于70％的乙

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